Mengenai Saya

Foto saya
tangerang, tangerang, Indonesia
ان اكون احسنهم خلقا ان اكون اوسعهم علم ان اكون اجملهم صورا ان اكون اكثرهم مالا
Diberdayakan oleh Blogger.
RSS

PENETAPAN KADAR KAFEIN DALAM MINUMAN DENGAN KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI ( HPLC )


PENETAPAN KADAR KAFEIN DALAM MINUMAN
DENGAN KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI ( HPLC )

TUJUAN PERCOBAAN
1.    Mahasiswa mengetahui prinsip dasar analisa sampel dengan alat HPLC
2.    Mahasiswa mampu menentukan kadar kafein dalam suatu sampel


TEORI SINGKAT
Kromatografi   merupakan   salah   satu       tekhnik   pemisahan   yang   dapat
memisahkan  setiap  komponen  dalam  suatu  campuran.  Pemisahan  ini  didasarkan
pada  perbedaan  migrasi  setiap  komponen  yang  disebabkan  karena  perbedan  sifat
interaksi  dari  setiap  komponen  pada  fase  diam  dan  fase  gerak.  Berdasarkan  fase
geraknya   metode   kromatografi   terbagi   menjadi   kromatografi   cair   dan
kromatografi  gas.  Salah satu contoh dari  pengembangan kromatografi cair adalah
HPLC  (  High  Perfomance  Liquid  Chromatograpy  )  atau  kromatgrafi  cair  kinerja
tinggi.
HPLC   didefinisikan   sebagai   kromatografi   cair   yang   dilakukan   dengan
memakai   fase   diam   yang   terikat   secara   kimia   pada   penyangga   halus   yang
distribusi ukuranya sempit ( kolom ) dan fase gerak yang dipaksa mengalir dengan
laju  alir  yang  terkendali  dengan  memakai  tekanan  tinggi  sehingga  menghasilkan
pemisahan dengan resolusi tinggi dan waktu yang relative singkat.
Resolusi  adalah  pengukuran  secara  fisik  suatu  pemisahan.  Resolusi  dapat
dirtngkatkan   dengan   mengooptimasi   parameter-parameter   HPLC   yaitu   retensi,
selektivitas,   dan   efisiensi.   Secara   praktis   parameter-parameter   tersebut   dapat
dioptimalkan dengan mengubah :
1.    komposisi dari fase gerak
2.    laju alir
3.    sifat kimia dari fase gerak
4.    jenis kolom







Metode   HPLC   dapat   digunakan   untuk   analisa   kuantitatif   dan   sekaligus
kualitatif.  Untuk  analisa  kualitatif  dengan  membandingkan  kromatogram  sampel
dengan    kromatogram        baku    pembanding    berdasarkan   waktu    retensinya.
Sedangkan untuk analisa kuatitatif dapat digunakan dengan persamaan :


Cx = Ax / Ap X Cp

Keterangan :
A = Peak area = Luas puncak
C = Konsentrasi
X = sampel
P = pembanding
Atau  jika  ingin  mendapatkan  data  yang  lebih  valid  dapat  pula  ditentukan
dengan menggunakan kurva kalibrasi larutan standar.


ALAT DAN BAHAN
Alat
1.   HPLC Series 200 dengan detector 275 nm Perkin Elmer
2.   Kolom : Supelcosil LC : 18,   ( 25 cm X 4,6mm, 5 μm )
3.   Pipet volum 10 mL
4.   Tabung ekstraksi
5.   Kertas saring
6.   Corong
7.   Baker glass   50 mL
8.   Gelas ukur 50 mL
Bahan
1.   Minuman Berkafein ( dalam percobaan ini sampel  yang digunakan adalah
Teh Poci Tubruk )
2.   Dichlorometane 50 mL
3.   Asam Asetat 70 %   ( sebagai fase gerak )
4.   Methanol 30% ( sebagai fase gerak )
5.   Larutan kafein baku / standar 200 ppm







PROSEDUR KERJA
A.      Tahap Preparasi
1.   Ambil   sampel   sebnayak   50   mL   kemudian   diekstraksi   dengan   larutan
dichlorometane sebanyak 50 mL dengan menggunakan tabung ekstraksi.

2.   Diamkan  kira-kira  selama  15  menit  (  proses  aerasi  ),  sambil  mengamati
reaksi   yang   terjadi,   maka   dengan   sendirinya   akan   tampak   pemisahan
antara  air  dengan  dikchlorometane  yang  mengikat  kafein.          Pemisahan  ini
terjadi   karena   adanya   perbedaan   berat   jenis   antara   dichlorometane   (
1.3g/cm³ ) dengan air (1g/cm³ )

3.   Ambil  beberapa  mL   sampel  (  ambil  sampel  yang  berada  dibawah  sekat
pemisah)  yang   telah  diekstraksi,  kemudian  saring  dengan  menggunakan
kertas saring.

4.   Ambil  sebanyak  1  mL  sampel  yang  telah  disaring  kemudian  masukan  ke
dalam gelas vial.
B.       Tahap Injection ke HPLC
1.   Masukan   sampel   yang   akan   diuji   ke   dalam   auto   sampler.   Tentukan
komposisi  fase  gerak  yakni  Asam  Asetat  70  %                dan  Methanol  30%  serta
laju alir 1,5 mL / menit.
2.   Lakukan pemograman alat
3.   Sampel diinjeksikan melalui injection port secara otomatis
4.   Menentukan kadar kafein dalam sampel


DATA PENGAMATAN
§     Data pengamatan dapat dilihat dalam lampiran







No
Peak area
Kafein Standar
Kafein dalam Sampel ( Teh Poci )
1
2601417,40
2216635,31

 
PEMBAHASAN
ANALISIS KUANTITATIF
Metoda Persentase Tinggi / Lebar Puncak
Metoda   ini   disebut   juga   Metoda   Normalisasi   Internal.   Untuk   analisis
kuantitatif   diasumsikan   bahwa   lebar   atau   tinggi    Puncak   (Peak)   sebanding
(proportional)   dengan   kadar   /   konsentrasi   zat   yang  menghasil   puncak.   Dalam
metoda  yang  paling  sederhana  diukur  lebar  atau  tinggi  Puncak,  yang  kemudian
dinormalisasi  (ini  berarti  bahwa  setiap  lebar  atau  tinggi  Puncak  diekspresikan
sebagai   suatu   persentase   dari   total).   Hasil   normalisasi   dari   lebar   atau   tinggi
puncak memberikan komposisi dari campuran yang dianalisis, seperti contoh pada
Tabel berikut:







Berdasarkan  data  table  diatas,  maka  kadar  kafein dalam  sampel  (  teh  poci  )
dapat dianalisis dengan mengunakan persamaan :


Cx = Ax / Ap X Cp
=         2216635,31                          X            200 ppm
2601417,40
=   170,42 ppm
Maka dalam 1 mL sampel yang diuji terdapat 0,17042   mg kafein.

Ada dua masalah dengan pendekatan ini, yaitu:
Kita  harus  yakin  bahwa  kita  telah  menghitung  semua  komponen,  yang  tiap-tiap
komponen   muncul   sebagai   suatu   puncak   yang   terpisah   pada   kromatogram.
Komponen-komponen   dapat   berkoelusi,   atau   ditahan   di   dalam   kolom,   atau
,terelusi tanpa terdeteksi. Kita harus mengasumsi bahwa kita memperoleh respons
detektor yang sama untuk setiap komponen   Untuk mengatasi kesulitan ini, maka
kalibrasi detektor diperlukan.







ANALISA KOMPOSISI ASAM LEMAK DALAM MINYAK CURAH
DENGAN GCMS

TUJUAN PERCOBAAN
1.    Mahasiswa  mampu  memahami  prinsip-prinsip  dasar  analisa  sampel  dengan
GCMS.
2.    Mahasiswa   mampu   menjelaskan   kembali   dan   melaporkan   hasil   percobaan
secara ringkas, sistematis, dan akurat.
3.    Mahasiswa  mampu  menentukan  komposisi  asam  lemak  dalam  minyak  curah
dengan tekhnik analisa GCMS


TEORI SINGKAT
Kromatografi gas adalah metode analisis, dimana sampel terpisahkan secara
fisik  menjadi  bentuk  molekul-molekul  yang  lebih  kecil  (  hasil  pemisahan  dapat
dilihat   dengan   berupa   kromatogram   ).   Sedangkan   Spektroskopi   masa   adalah
metode analisis, dimana sampel yang dianalisis akan diubah menjadi ion-ion gas-
nya,  dan  masa  dari  ion-ion  tersebut  dapat  dikur  berdasarkan  hasil  deteksi  berupa
Spectrum Massa.
Pada   GC   hanya   terjadi   pemisahan   untuk   mendapatkan   komponen   yang
diinginkan,  sedangkan  bila  dilengkapi  dengn  MS  (  berfungsi  sebagi  detector  )
akan dapat mengidentifikasi komponen tersebut, karena bisa   membaca Spektrum
bobot molekul pada suatu komponen, karena dilengkpi dengan Library ( reference
) yang ada pada software. Secara instrument, MS adalah detector GC
Sampel-sampel  yang  dapat  dianalisis  dengan  menggunakan  GCMS,  harus
memenuhi beberapa syarat diantaranya :
§     Dapat diiuapkan pada suhu  400 C
§     Secara termal stabil ( tidak terdekomposisi pada suhu  400 C
§     Sampel-sampel   dapat dianalisis setelah mlalui tahapan preparasi yang khusus.







Proses Pemisahan GC
Pemisahan komponen senyawa  dalam GC  terjadi di  dalam koklom ( kapiler
)  dengan  melibatkan  dua  fase,  yaitu  fase  diam  dan  fase  gerak.  Fase  diam  adalah
zat yang ada di dalam kolom, sedangkan fase gerak adalah gas pembawa ( Helium
ataupun hydrogen dengan kemurnian tinggi, yaitu 99,.995 %.
Proses pemisahan dapat terjadi karena terdapat perbedaan kecepatan alir dari
tiap    molekul   di    dalam   kolom.   Perbedaan   tersebut   dapat   disebabkan  oleh
perbedaan afinitas antar molekul dengan fase diam yang ada di dalam kolm.


Instrumentasi GCMS
Bagian-bagian dari instrument Kromatografi Gas adalah sebagia berikut :
§     Pengatur aliran gas ( Gas Flow Controller )
§     Tempat injeksi sampel ( Injector )
§     Kolom ( tempat terjadinya pemisahan )
§     Lalu dihubungkan pada interface ( fungsi interface adalah sebagai penghubung
antara GC dan MS )
Sedangkan bagian-bagian dari   Spektrofotometer Massa adalah sebagai berikut :
§     Tempat masuk sampel ( malalui interface )
§     Sumber Ion ( Ion Source )
§     Pompa Vakum ( Vacum Pump )
§     Penganalisis Massa ( Mass Analyzer )
§     Detektor ( Electron Multiplier Detector )
Setelah   data   terdeteksi,   lalu  data   dikirimkan   ke   system   pengolah   data   (   Pada
Personal Computer ) untuk diolah dan dianalisis.
Pengaturan  temperature  kolom  pemisahan  sangat  penting karena  pemisahan
komponen   sangat   dipengaruhi   oleh   kenaikan   temperature   dan   laju   alir   gas
pembawa.  Kromatigrafi  Gas  Spektroskopi  Massa  dapat  digunakan  untuk  analisis
kualitatif   dan   analisis   kuantitatif   dengan   cara   membandingkan  (   standar   )
berdasrkan waktu retensi.







ALAT DAN BAHAN
Alat
1.    GCMS QP 2010 [  Kolom 12 Tx  MS,  temperature  kolom 80 C,  temperature
injeksi 250 C, Carier gas He, Injection 201 ( split ) ]
2.    Gelas ukur
3.    Beker glass
4.    Tabung reaksi beserta rak-nya
5.    Pemanas
6.    Pipet mikro
7.    Pipet biasa
8.    Vorteks
9.    Centrifuge
Bahan
1.    Methanol
2.    NaOH 0,5 N dalam methanol
3.    Sampel ( Minyak Curah )
4.    N-Heksan
5.    BF3 dalam methanol


PROSEDUR KERJA
A.   Petunjuk Pemakaian GCMS
§     Buka karan gas He
§     Tekan tombol power GCMS
§     Nyalakan   computer  dan   proses   pemvakuman,  perhatikan   hinga   auto
vakum selesai
§     Pada  munu  Real  Time  Analisis  kik  Metode  file.  Bila  ingin  memanggil
metode   lama   klik   open   lalu   pilih   metode   yang   diinginkan.   Bila   ingin
membuat   metode   baru   klik   new   lalu   isi   sampel   login   dan   tentukan
temperature  program,  kolom  oven,  suhu  injeksi,  split  rasio,  lalu  OK  dan
tunggu   hingga   kondisi   temperature   tercapai   dan   siap   analisis              (   redy,
berwarna hijau )







B.   Preparasi Sampel ( Proses Esterifikasi )
§     Sebanyak 2 mL sampel ( minyak curah ) masukan ke dalam tabung reaksi
kemudian   direaksikan   (   tambahkan   )   4,5   mL   NaOH   0,5   N   (   dalam
methanol )
§     Vorteks  (  mixer  )  dan  dipanaskan  selama  5  menit  pada  suhu  70  C  sampai
terbentuk 2 lapisan.
§     Kemudian  didinginkan,  setelah  dingin  tambahkan (  reaksikan  )  3  mL BF3
dalam methanol kiemudian di vorteks kembali.
§     Kemudian dipnaskan kembali selama 5 menit
§     Kemudian didinginkan, selanjutnya tambahkan ( reaksikan ) dengan 3 mL
Heksan
§     Vorteks, lalu panaskan kembali selama 5 menit.
§     Kemudaian disentrifuge ( 7000 rpm ) selama 5 mneit
§     Kemudian ambil sampel yang berada pada lapisan atas untuk diuji..


C.   Analisa Komposisi Asam lemak dengan GCMS
§     Sebanyak 1 mL sampel minyak curah yang telah diesterifikasi diihjeksikan
ke dalam kolom GC dengan menggunakn metode Auto Sampler.
§     Pemisahan dilakukan dalam kolom RTx  MS Restech,
§     Hasil    analisa   berupa   Spektrum   Massa    dibandingkan  dengan   library
WILLEEY    147   dan   NIST    47   yang    terdapat   dalam   GCMS    untuk
mengetahuui komposisi asam lemak yang terdapat pada sampel
DATA PENGAMATAN
§     Data pengamatan dapat dilihat dalam lampiran.







PEMBAHASAN
Berdasarkan  hasil  chromatogram,  diperoleh  puncak-puncak  dengan  tinggi
tertentu,  dengan  adanya  puncak-puncak  tersebut  dapat  dijadikan  indikasi  adanya
zat penyusun ( asam lemak ) yang merupkan komposisi dari sampel.
Dari   sampel   yang   kami   uji   yaitu   minyak   curah,   secara   kualitatif   dalam
sampel  terdapat  berbgai  macam  asam  lemak  yang  terkandung  didalamya,  yaitu
meliputi :
1.               Methyl tridecanoat
2.               Methyl mrystate ( C14H28O2 )
3.               Methyl ( 9E )-9-dodecenoat ( C13H24O2 )
4.               Methyl palmitat ( C17H34O2 )
5.               Methyl margarate ( C18H36O2 )
6.               Methyl linoleat ( C19H34O2 )
7.               Methyl oleat ( C19H36O2 )
8.               Methyl stearat ( C19H38O2 )
9.               Methyl arachate ( C21H42O2 )


Dalam  percobaan  ini  kami  mengidentifikasi  asam  lemak  yang  menyusun
sampel   ( minyak curah ) hanya baru pada tahap identifikasi secara kualitatif saja.
Namun  untuk  mendapatkan  data  kadar  dari  masing-masing  asam  lemak  secara
kuantitatif   kita   harus   menggunakan   standar.   Cara   perhitunganya   hampir   sama dengan   penghitungan pada hitungan kuantitatif   HPLC.

  • Digg
  • Del.icio.us
  • StumbleUpon
  • Reddit
  • RSS

0 komentar:

Posting Komentar